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    组织捣碎机在生化制备中常用的方法

    发布时间: 2022-01-07  点击次数: 383次
     在生化制备中常用的方法有: 
    1. 反复冻溶法 原理:因突然冷冻,细胞内冰晶的形成及胞内外溶剂浓度的突然改变而破坏细胞。 方法:将待破碎的细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。 特点:此法适用于组织细胞,多用于动物性材料,对微生物细胞作用较差。 
    2. 急热骤冷法 将材料投入沸水中,维持85-90分钟,至水浴中急速冷却,此法可用于细菌及病材料。
    3. 超声波处理 用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂,此法多适用于微生物材料,用大肠杆菌制备各种酶,常选用50-100毫克菌体/毫升浓度,频高于15~20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及种类型等因素有关。 行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及种类型等因素有关。 特点:操作简单,重复性较好,节省时间;多用于微生物和组织细胞的破碎。 存在问题:超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递,散热均有困难,应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。空化作用是细胞破坏的直接原因,同时会产生活性氧,所以要加一些巯基保护剂。 
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